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目前市場主流的PCR儀從使用特性上說,基本上分為常規(guī)型PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR儀以及功能相對更強大的數(shù)字型PCR儀(熒光定量PCR儀),梯度和原位PCR儀分別是在常規(guī)型的基礎(chǔ)上增加了原位模塊和梯度溫度的功能。具體分類,大家可以去瀏覽我司之前給大家分析過的PCR儀分類這篇文章,今天在這里就不給大家重復(fù)敘述了;本篇文章以前三種PCR儀作為案例給大家簡單分析下,后面再給大家描述數(shù)字型PCR儀異常的原因。如果我們在使用PCR儀的過程中,若出現(xiàn)擴增帶異常,該怎么去處理,該如何更好的去規(guī)避它呢?PCR儀廠家告訴大家PCR儀擴增條帶異常的原因
一、內(nèi)在因素:(多數(shù)發(fā)生在樣品池)
①:多數(shù)蛋白質(zhì)和特殊存在于染色體中的組蛋白,在樣品池中去分解和吸收,沒有被很好的去利用造成殘留。
②:引入樣品池中的蛋白純度不高或者存在污染源。
③:樣品池中殘留有酶抑制劑taq,使酶失活造成不可逆。
④:在樣品池中制備的時候,化合物中酚類容易被揮發(fā)導(dǎo)致實際含量低或者在樣品池中吸收過于飽和。
⑤:操作員流動性大或者沒有固定的制備程序,導(dǎo)致消化液的濃度成分存在差異,分解的能力差異化。
⑥:核酸的萃取工藝存在缺陷,導(dǎo)致樣品中濃度不足。
二、外在因素:
①:PCR儀的擴增標準是以微升(ul)為單位的,靳瀾系列PCR儀標準狀態(tài)下,多為30或者50微升;在能確定PCR擴增反應(yīng)量平穩(wěn)狀態(tài)下,則可繼續(xù)保持20微升的含量。具體根據(jù)操作者的經(jīng)驗來確定,如不確定,當以中間為準,緩慢增加或者遞減。
②:二階離子和陽離子成分含量偏高或者偏低,影響PCR儀在擴增中的產(chǎn)生效率,從而導(dǎo)致擴增的示警。
③:若存在兩種引入物,相對濃度偏差大,較嚴重的不對稱也會降低擴增的效率。(具體在引入物的多少、引入物的成分)
④:更換活性酶,提高擴增中的活性度。
以上就是今天給大家總結(jié)的幾點造成PCR儀擴增異常的幾個因素,具體原因具體對待,歡迎致電我司
文章來源 :上海靳瀾儀器制造有限公司/